همسانه‌سازی ژن زیرواحد بتا هورمون گونادوتروپین جفت انسانی در پی انتقال ژن به اسپرم خروس

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 کارشناسی ارشد علوم طیور، دانشگاه تربیت مدرس

2 دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده کشاورزی، تخصص: بیماری های طیور

3 عضو هیات علمی پژوهشگاه رویان

4 عضو هیات علمی گروه علوم طیور، دانشگاه تربیت مدرس

چکیده

هدف از این مطالعه، همسانه‌سازی‌زیرواحد بتای هورمون گونادوتروپین جفت انسانی در ناقل‌ مناسب بود که بتواند از طریق اسپرم در تولید طیور تراریخت به کار گرفته شود. به این منظور زیرواحد بتای این هورمون به کمک یک جفت آغازگر اختصاصی تکثیر و درناقل T همسانه‌سازی شد. فرآیند ترانسفورماسیون پلاسمید نوترکیب در سلول‌های مستعد اشریشیاکلی انجام گرفت و کلونی‌های دارای پلاسمید نوترکیب به‌وسیله PCR انتخاب شدند. صحت تخلیص پلاسمید ابتدا توسط هضم آنزیمی و نهایتاً به روش توالی‌یابی بررسی شد. پس از آن، زنجیره بتا از ناقلT جداسازی شد و مجددا در ناقل بیانی pcDNA3.1+ همسانه‌سازی شد. نتایج آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که پلاسمید نوترکیب hCGβ/ pCDNA3.1+ با توالی صحیح ساخته شد و تطابق کامل با ژن زیرواحد بتای هورمون گونادوتروپین جفت انسانی داشت. می توان نتیجه گرفت که پلاسمید نوترکیب حاوی زیر واحد بتای گونادوتروپین جفت انسانی ساختار مناسبی برای انتقال به اسپرم خروس دارد که می تواند در تولید جوجه های تراریخت به کار گرفته شود.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Cloning of human chorionic gonadotropin beta subunit for rooster sperm mediated gene transfer

نویسندگان [English]

  • Mehdi Noorani 1
  • Shaban Rahimi 2
  • Abdolhoseein Shahverdi 3
  • Mohsen Sharafi 4
1 MSc in Poultry Science, Tarbiat Modares University
2 Professor Department of Poultry Science, Faculty of Agriculture, Tarbiat Modares University
3 Faculty member at Royan Institute
4 Faculty member at the Department of Poultry Science, Tarbiat Modares University
چکیده [English]

The aim of this study was cloning of the beta subunit of human chorionic gonadotropin in an appropriate vector for production of transgenic chicken trrough sperm mediated gene transfer. In this regard, transgenic chicken production tecnology has taken into consideration for having many advantages such as short generation times, the large number of production of offspring and suitable pattern of protein glycosylation. To date, no study has been conducted on the cloning of the beta subunit of human chorionic gonadotropin for rooster sperm. For this purpose, the hormone beta subunit were amplified by a specific primer pairs, and cloned in T vector. The recombinant plasmid was transformed into Competent E. coli cells and colonies that containing recombinant plasmids were selected by colony PCR.The validity of extracted plasmid were analyzed by enzyme digestion and sequencing. The beta chain of T vector was isolated and was cloned again into pcDNA3.1 + expression vector. The results of enzyme analysis and sequencing indicated that recombinant plasmid pCDNA3.1 +/βhCG were cloned with the correct sequence and completely matched up with human chorionic gonadotropin beta subunit gene that can be concluded that it has sutible stracture for sperm mediated gene transfer.

کلیدواژه‌ها [English]

  • plasmid
  • Sperm
  • sequencing
  • transgenic chicken
1.      Collares T, Campos VF, de Leon PMM, Cavalcanti PV, Amaral MG, Odir A, Dellagostin, JCD, and Fabiana K (2011) Transgene transmission in chickens by sperm-mediated gene transfer after seminal plasma removal and exogenous DNA treated with dimethylsulfoxide or N, N-dimethylacetamide. Journal of Biosciences, 36(4): 613-620.
2.      Hammer RE, Pursel VG, Rexroad CE, Wall RJ, Bolt DJ, Karl ME, Richard DP, and Ralph LB. (1985) Production of transgenic rabbits, sheep and pigs bymicroinjection. Nature, 315(6021): 680-683.
3.      [3]. Houdebine LM (2007) Transgenic animal models in biomedical research. Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Volume 1, Emerging Strategies for Targets and Biomarker Discovery, 163-202.
4.      Iles RK (2007) Ectopic hCGβ expression by epithelial cancer: malignant behaviour, metastasis and inhibition of tumor cell apoptosis. Molecular and Cellular Endocrinology, 26(0): 264-270.
5.      Ind T, Iles R, Shepherd J and Chard T (1997) Serum concentrations of cancer antigen 125, placental alkaline phosphatase, cancer‐associated serum antigen and free beta human chorionic gonadotrophin as prognostic markers for epithelialovarian cancer. BJOG: An International Journal of Obstetrics & Gynaecology, 104(9): 1024-1029.
 6.      Lavitrano M, Camaioni A, Fazio VM, Dolci S, Farace MG, and Corrado S (1989) Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice. Cell, 57(5): 717-723.
7.      Lavitrano M, Maione B, Forte E, Francolini M, Sperandio S, et al. (1997) The interaction of sperm cells with exogenous DNA: a role of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules. Experimental Cell Research, 233(1): 56-62.
8.      McCreath KJ, Howcroft J, Campbell K, Colman nA, Schnieke et al. (2000) Production of gene-targeted sheep by nuclear transfer from cultured somatic cells. Nature, 405(6790):1066-1069.
9.      Mozdziak PE and Petitte JN (2004) Status of transgenic chicken models for developmental biology. Developmental Dynamics, 229(3): 414-421.
10.   Romanov MN (2007) Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction. Journal of Heredity, 98(1): 97-98.
11.   Shoham Z, Mannaerts B, Insler V and Bennink HJC (1998) Induction of follicular growth using recombinant human follicle-stimulating hormone in two volunteer women with hypogonadotropic hypogonadism. Fertility and Sterility, 69(2): 10S-14S.
12.   Sugahara T, Grootenhuis PD, Sato A ,Kudo M, Ben-Menahem D, Mary RP, Aaron JW and Irving B (1996) Expression of biologically active fusion genes encoding the common α subunit and either the CGβ or FSHβ subunits: role of a linker sequence. Molecular and Cellular Endocrinology, 125(1): 71-77.
13.   Wall R (2002) New gene transfer methods. Theriogenology, 57(1): 189-201.
14.   Zygmunt M, Herr F, Keller-Schoenwetter S, Kunzi-Rapp K, Münstedt K, Klaus T (2002) Characterization of human chorionic gonadotropinas a novel angiogenic factor. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 87(11): 5290-5296.